No se requiere de ayuno. La muestra debe tomarse entre el 3er y 5to día de vida. Obtener la muestra de sangre por punción del talón. No punzar los dedos. Para incrementar el flujo sanguíneo en el sitio de punción, cubrir previamente el talón con algodón embebido en agua caliente durante 3 minutos. Realizar la punción con lanceta estéril, descartando la primera gota de sangre. Obtener la muestra presionando el talón. Si la presión ejercida es exagerada, la muestra puede diluirse o hemolizarse.